19 декабря 2018
BLOGNEWS — мнения и события

Методы выделения вирусов

Для выделения вирусов используют материал, в котором возможно наличие вируса (лизат бактерий, куски тканей животных, листья растений и т.д.). Материал в случае необходимости измельчают, гомогенизируют для того, чтобы в управляемых условиях перевести вирусы в суспендированное состояние.

Большинство вирусов животных выделяют из сыворотки крови. Аналогичного среды для выделения вирусов растений нет. Поэтому для выделения вирусов растений используют гомогенаты растительных органов, которые переносят в искусственную среду. Ряд факторов среды влияет на стабильность вирусов.

Следует помнить, что:

1. Многие вирусы стабильны лишь в узком интервале pH и при выделении вируса этот показатель среды не должен выходить за установленные пределы.
2. Часто используют фосфатные буферы, но иногда они могут быть непригодными и более эффективным может оказаться, например, боратный буфер.
3. Некоторые вирусы проявляют активность только при наличии ионов металлов (Са2+ или Mg2+). Важным фактором является ионная сила буфера. Вирус мозаики люцерны преципитирует при концентрации Mg2+> 0,001 М и деградирует при концентрации, превышающей 0,1 М.
4. Многие вирусы в условиях in vitro очень быстро теряют активность, очевидно, вследствие разрушения их РНК рибонуклеазы, поэтому очень часто к среде добавляют Mg-бентонит. При его наличии нуклеазного активность уменьшается до нуля.

Чтобы освободить экстракт от бактериальных инфекционных агентов можно использовать бактериальные фильтры, задерживающие линейные части, размеры которых составляют 0,5 мкм и более (крупнейший вирус достигает 0,8 мкм).

В случае выделения вирусов из разных тканей и гомогенатов лучшие результаты дают: дифференциальное центрифугирование, осаждение аммоний сульфатом, центрифугирования в градиенте сахарозы и цезий хлорида, обработки ферментами.

Суть дифференциального центрифугирования состоит в ряде центрифужных циклов с высокими и низкими скоростями, сменяющими друг друга. В результате центрифугирования при 20-50 тыс. Об/мин. вирусы и другие части выпадают в осадок. Затем полученный осадок суспендируют в буферном растворе и суспензию снова центрифугируют при 8-10 тыс. Об./мин. для удаления мембран и волокнистых компонентов клетки, денатурированных белков и т.д. Следующее центрифугирования при 30-50 тыс. Об./мин. снова приводит к осаждению вирусов. Двоабо трехкратное повторение такого цикла позволяет легко выделить СТМ и другие вирусы.

Иногда выгодно сочетать дифференциальное центрифугирование с высаливанием аммоний сульфатом. Для этого осадок неочищенного вируса суспендируют в воде, обрабатывают в растворах с растущими концентрациями аммоний сульфата. Когда появляется осадок, его отделяют центрифугированием при 8 тыс. Об./мин., а к супернатанта снова медленно добавляют аммоний сульфат, пока не образуется осадок, который вновь отделяют центрифугированием.

Очень ценным является метод очистки вирусов путем центрифугировании в растворах с возрастающей концентрацией сахарозы или глицерина (5-25%). С помощью полученного градиента сахарозы можно достичь хорошего разделения вирусов и их компонентов.Вместе с тем вирусы и их компоненты разделяются слоями, которые можно легко обнаружить, осветив пробирку. Слой, содержащий вирусы, не сложно отобрать с помощью шприца. Возможен еще и другой способ отбора вирусов из пробирки. Ного применяют в том случае, когда имеют дело с малыми концентрациями вируса. Для этого дно пробирки прокалывают и ее содержание начинает медленно вытекать. Его собирают в другие пробирки и уже в них определяют наличие вирусов.

09.06.2017

Похожие записи

В Крыму оккупантам включили гимн Украины

В Крыму оккупантам включили гимн Украины
Новости

В оккупированном Симферополе неизвестные в День памяти жертв депортации крымскотатарского народа запустили сине-желтый дрон. Как написал в Facebook крымский журналист "Радио Свобода" Антон Наумлюк, к беспилотнику прикрепили акустическую колонку. ...

Читать дальше

Более 2200 фанов Реала сдали билеты на ЛЧ в Киеве

Более 2200 фанов Реала сдали билеты на ЛЧ в Киеве
Спорт

Руководство мадридского клуба выделило держателям абонементов около 13 тысяч билета на финальный матч. Более 2,2 тысяч болельщиков Реала сдали билеты на финал Лиги чемпионов УЕФА из-за проблем с размещением в Киеве, сообщает AS. Отм...

Читать дальше

Водоросли помогут людям избавиться от слепоты

Водоросли помогут людям избавиться от слепоты
Здоровье и красота

Потерять (или и вовсе не иметь с рождения) возможность видеть очень похожа не на жизнь, а на сплошное мучение. Ведь человек лишается одного из самых важных органов чувств. Потому ученые очень давно ведут исследования с целью помочь людям вернуть утра...

Читать дальше

Маск показал финальный дизайн корабля для запуска астронавтов на МКС

Маск показал финальный дизайн корабля для запуска астронавтов на МКС
Технологии

Основатель SpaceX Илон Маск показал окончательный дизайн пилотируемого корабля Crew Dragon, предназначенного для доставки экипажей на Международную космическую станцию (МКС). Фото Crew Dragon Маск опубликовал в своем "Твиттере". "Корабль Crew Drago...

Читать дальше